为了保证科研进度的进行，我与科创团队的一行人一早来到实验室进行分子实验，确认了MMP9的分泌能够影响到PNN后，我们对实验鼠进行脑部组织蛋白的提取来进行WB实验和qPCR实验。
我们将脑部组织分为两部分加入裂解液进行组织裂解，分别加入trizol试剂和Brain tissue protein extraction kit试剂来进行RNA和蛋白质的提取，在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。组织蛋白抽提试剂应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂。使用该抽提试剂提取的组织蛋白，可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作，并可采用BCA等方法进行蛋白定量。组织蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。因此我们能够安全有效的保证蛋白质和RNA的提取以及完整性。
实验分为三组，对照组WT鼠、training小鼠以及进行R+E实验的小鼠，我们将通过对小鼠PNN、MMP9的蛋白质含量以及RNA表达量来确定PNN与MMP9之间的关系，我们首先进行了荧光显微镜观察有如下结果
根据荧光的增多可以判断脑区的激活，存在MMP9荧光含量的增加，同时出现了PNN荧光含量的减少，初步判断在电针后由于MMP9的RNA表达量增加使得MMP9蛋白含量增加，抑制PNN的合成同时降解PNN蛋白。
我们将上样后的样品板放入电泳仪中进行电泳，方便我们对蛋白质进行筛选，在完成转膜、染色和显色等流程后，我们得到了我们的目的条带，三组样品中training组小鼠的PNN蛋白量要多于其他两组，而R+E实验组小鼠的MMP9的表达量要高于其他两组，因此可以判断MMP9的升高会引起PNN蛋白的减少，因为MMP9是蛋白酶，因而判断在电针处理后MMP9表达量上升，降解PNN蛋白。
同时我们得到了qPCR的结果，PCR仪显示在进行电针处理后MMP9的RNA含量有所上升，PNNRNA的含量下降，说明在电针后MMP9的表达增多，PNN的表达减少。
经过一天的实验，我们的课题进度又有所前进，这对于我们来说应该是最好的奖励吧，希望明天的工作会更好。
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